贵阳HE染色质量

冷冻切片HE染色步骤:（1）冰冻切片固定10～30s

（2）稍水洗1～2s

（3）苏木**染色（60℃）30～60s

（4）流水洗去苏木**5～10s

（5）1%盐酸乙醇1～3s

（6）稍水洗1～2s

（7）促蓝液返蓝5～10s

（8）流水冲洗15～30s

（9）0.5%曙红液染色30～60s

（10）蒸馏水稍洗1～2s

（11）80%乙醇1～2s

（12）95%乙醇1～2s

（13）无水乙醇1～2s

（14）石炭酸二甲苯2～3s

（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s

（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s

（17）中性树胶封固

注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。

注意事项：

切片脱水透明，切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 硝酸银染色法：将胃幽门螺杆菌染色；胃幽门螺杆菌棕黑或黑色，背景淡黄色。贵阳HE染色质量

    甲基绿派洛宁法：1、试剂配制：（1）2%甲基绿水溶液：甲基绿（methylgreen）1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法详后。（2）5%派洛宁水溶液：派洛宁G（pyronineG）1g蒸馏水加至20ml（3）醋酸盐缓冲液（pH）醋酸液41ml醋酸钠液59ml（4）甲基绿派洛宁染液：2%甲基绿水溶液（经抽提）5ml5%派洛宁水溶液1ml蒸馏水12ml醋酸盐缓冲液（pH）18ml2、操作步骤：（1）新鲜组织固定于Carnoy氏液（4℃）3~6小时，经95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。（2）切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。（3）置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。（4）取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。（5）用**迅速分化。（6）转入**二甲苯（1:1）稍洗。（7）二甲苯透明2~3次。（8）中性树胶封固。结果：存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。3、对照方法：（1）取另一连续切片用核糖核酸酶1mg/1ml于37℃温箱内消化3小时，蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。（2）切片在10%高氯酸于4℃处理12~18小时，水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟，流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。 昆明番红固绿染色评价镀银染色是神经元和神经纤维的主要染色法。

显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的染色步骤：

(1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。

(2)高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min.

(3)5%硫酸铁铵1min.

(4)Gomori氨性银改良液染1min.

(5)蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min.

(6)蒸馏水洗2次，氯化金30s，蒸馏水洗1次。

(7)70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h.

(8)95%乙醇分化1min左右。

(9)浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min.

(10)直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

3.结果

胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。

4.注意事项

氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面的银挥发.

颗粒而沉积在组织上。

弹力纤维染色应用：

（1）动静脉的辨认：在血管病变时是动脉还是静脉以及是否为血管壁难辨认时，弹力纤维染色有助于辨认。有弹力板者为动脉，有弹力纤维构成血管轮廓者为血管。弹力纤维抗损伤能力较强，故弹力性纤维构成血管轮廓不易损坏。

（2）弹力纤维瘤的诊断：弹力纤维染色可见瘤样病变内有大量弹力纤维增生，非真性**。

（3）心血管先天性弹力组织增生，这组疾病有先天性内膜炎及冠状动脉的弹力纤维组织增生。弹力纤维染色有助于诊断。

（4）弹力纤维损伤性疾病：这组疾病有肺气肿、***、大动脉中层炎症等，弹力纤维染色有助于这些疾病的观察诊断。

（5）一些与弹力纤维变化有关的皮肤疾病的诊断与鉴别诊断：这组疾病有皮肤松弛症，萎缩性硬化性苔藓等，其诊断与鉴别诊断常依赖于弹力纤维染色，以观察弹力纤维变化。 苏丹Ⅲ染色法：将脂肪和细胞核染色，遇脂肪变橘黄色，细胞核呈蓝色。

脂肪染色剂

苏丹Ⅲ染液

取0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。

这染液能染脂肪，还能染木栓、角质层。

血液染色剂

配方一、瑞氏 (Wright's)染液

取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存,即可使用。

新鲜配制的染液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4~6.8。因此，染色时加入缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。

这种染液除能染血液，还能染疟原虫。

瑞氏染料可以自制。在100是升05%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上1小时，取出冷却后过滤在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升。随加、随搅拌，使混合液呈紫色。

静置一夜后，用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内,充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。

配方二、甲基紫染液

取甲基紫0.5克，加到100毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。 阿尔辛蓝（AB）染色法：唾液酸及若硫酸化黏液物资以及一般黏液蓝色，细胞核红色。其他不着色或淡染。北京番红固绿染色上机

衰老的细胞由于代谢缓慢或停止，不能使美蓝还原，所以呈蓝色或者淡蓝色。贵阳HE染色质量

细菌特殊染色剂配方一、芽孢染液用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。

甲液：取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。

乙液：取番红花红0.5克,加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，集成番红花红复染液。

配方二、荚膜染液此配方先用甲液染色，后用乙液复染。

甲液：取结晶紫0.1克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。

乙液：取硫酸铜(31.3克)，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。

配方三、鞭毛染液

甲液

饱和明矾溶液2毫升5%石炭酸溶液5毫升

20%丹宁酸溶液2毫升

乙液

碱性品红11克95%酒精100毫升

使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。 贵阳HE染色质量

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